【硫酸铵沉淀】硫酸铵沉淀法的原理及步骤有谁知道硫酸铵沉淀法的原..._生物_凉一梦568
编辑： admin 2017-15-06
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抗体的纯化 ( 硫酸铵沉淀法）
一, 基本原理
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质.用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法.高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质.这种方法称之为盐析.盐浓度通常用饱和度来表示.硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广.
二, 试剂及仪器
1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等
2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 4
3. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ）
4. 蒸馏水
5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 )
6. 透析袋
7. 超速离心机
8. pH 计
9. 磁力搅拌器
三, 操作步骤
以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀.各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同.通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% .
（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）
1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中.用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 .此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）.
2.其它不同饱和度铵溶液的配制
（二）沉淀
1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ,除去细胞碎片；
2.保留上清液并测量体积；
3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中,终浓度为 1 ： 1 （
4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ）,使蛋白质充分沉淀.
（三）透析
1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）.弃上清保留沉淀；
2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中.沉淀溶解后放入透析袋对
PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（ 4 ° C ）,每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨；
3.透析液离心,测定上清液中蛋白质含量.
四,应用提示
（一） 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀,除去样品中的杂蛋白.
1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中,使浓度为 0.5:1 (v/v) ；
2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）,保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ,再次离心得到沉淀.将沉淀溶于 PBS ,同前透析,除去硫酸氨；
4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ,再次离心得到沉淀.将沉淀溶于 PBS ,同前透析,除去硫酸氨；
5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时,用预沉淀除杂蛋白是非常有效
（二）为避免体积过大,可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表 1 ）；硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用,可得到更进一步纯化的抗体.
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题1： 硫酸铵分级沉淀法原理和步骤是什么啊?
原理就是溶液中的离子强度不同时,不同蛋白质的溶解度不同,步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度50%时球蛋白沉淀,饱和时清蛋白沉淀…
题2： 【硫酸铵沉淀法的原理是什么?】[生物科目]
抗体的纯化 ( 硫酸铵沉淀法）
一,基本原理
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质.用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法.高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质.这种方法称之为盐析.盐浓度通常用饱和度来表示.硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广.
二,试剂及仪器
1 .组织培养上清液、血清样品或腹水等
2.硫酸铵（ NH 4 ） SO 4
3.饱和硫酸铵溶液（ SAS ）
4.蒸馏水
5.PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 )
6.透析袋
7.超速离心机
8.pH 计
9.磁力搅拌器
三,操作步骤
以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀.各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同.通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% .
（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）
1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中.用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 .此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L,25 ° C ）.
2.其它不同饱和度铵溶液的配制
（二）沉淀
1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ,除去细胞碎片；
2.保留上清液并测量体积；
3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中,终浓度为 1 ：1 （
4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ）,使蛋白质充分沉淀.
（三）透析
1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）.弃上清保留沉淀；
2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中.沉淀溶解后放入透析袋对
PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（ 4 ° C ）,每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨；
3.透析液离心,测定上清液中蛋白质含量.
四,应用提示
（一） 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀,除去样品中的杂蛋白.
1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中,使浓度为 0.5:1 (v/v) ；
2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）,保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ,再次离心得到沉淀.将沉淀溶于 PBS ,同前透析,除去硫酸氨；
4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ,再次离心得到沉淀.将沉淀溶于 PBS ,同前透析,除去硫酸氨；
5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时,用预沉淀除杂蛋白是非常有效
（二）为避免体积过大,可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表 1 ）；硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用,可得到更进一步纯化的抗体.
题3： 调节PH沉淀法的原理能不能详细说一下他的原理,如为什么Ca2+/Fe3+的分离可以通过PH的调节实现[化学科目]
水中氢氧根离子和氢离子的乘积是一个常数,调节ph值可以改变他们的量.ca和fe离子都可以与oh-反应生成沉淀,且h+含量低时co3-与ca2+形成碳酸钙沉淀.
题4： 有机溶剂沉淀法的原理是什么有关生化分离工程的知识怎么没有人来回答啊,郁闷!
①亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数,使溶质分子之间的静电引力增加,聚集形成沉淀；②水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度,压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度,降低了它的亲水性,导致脱水凝集
题5： 沉淀法的原理沉淀的原理
沉淀法是指在混合组分的溶液中加人与该溶液能互溶的溶剂,通过改变溶剂的极性而改变混合组分溶液中某些成分的溶解度,使其从溶液中析出.如在含有糖类或蛋白质的水溶液中,分次加入乙醇,使含醇量逐步增高,逐级沉淀出分子量段由大到小的蛋白质、多糖、多肽在含皂苷的乙醇溶液中分次加入乙醚或丙酮可使极性有差异的皂苷逐段沉淀出来等.