【末端修复】DNA建库时末端修复后要加A，它是具体怎么做到只加一个..._生物_裾汗撷
编辑： admin 2017-15-06
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Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端.只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接.
所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物,不需将PCR产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）.不需在PCR扩增产物上加接头,即可直接进行克隆.
可以用超声波进行DNA的打断!
其他同学给出的参考思路：
现在有很多商品聚合酶都会在所合成的DNA链末尾加一个A，这样就可以与T载体末尾突出的T互补，也就是现在常用的TA克隆。
打断DNA典型的情况下在1500r/min转速下30min可将DNA剪切成8Kb的分子群体
互助这道作业题的同学还参与了下面的作业题
题1： DNA修复包括哪些?
直接修复（direct repair）,核苷酸切除修复（excision repair）、碱基切除修复（base excision repair）和错配修复（mismatch repair）.
1.直接修复（direct repair）
是通过一种可连续扫描DNA,识别出损伤部位的蛋白质,将损伤部位直接修复的方法.该修复方法不用切断DNA或切除碱基.
一些蛋白质可以识别和修复某种损伤的核苷酸和错配的碱基,这些蛋白可以连续监测DNA.胸腺嘧啶二聚体就可以通过直接修复机制修复.胸腺嘧啶二聚体是紫外线辐射造成的.在所有原核生物和真核生物中都存在一种光激活酶（photoreactivating enzyme）,在可见光存在下,这种酶可以结合胸腺嘧啶二聚体引起的扭曲双螺旋部位,催化两个胸腺嘧啶碱基再生,正常的A-T碱基对重新形成,然后光复活酶从已修复好的DNA上脱落.
2.核苷酸切除修复（excision repair）
通过切除-修复内切酶使DNA损伤消除的修复方法.一般是切除损伤区,然后在DNA聚合酶的作用下,以露出的单链为模板合成新的互补链,最后用连接酶将缺口连接起来.
形成胸腺嘧啶二聚体会引起DNA双螺旋结构的变形,这样的损伤也可以通过核苷酸切除系统修复.修复系统中的主要酶ABC切除核酸酶.给出了ABC切除核酸酶修复DNA损伤的过程.首先ABC切除核酸酶从损伤部位的两侧切去含有损伤的DNA链.然后,解旋酶除去内切酶切点之间的DNA片段,有时DNA片段由外切酶降解,产生单链缺口.然后在DNA聚合酶的催化下按照互补链填充缺口,切口最后通过DNA连接酶连接.
3.碱基切除修复DNA
糖基化酶（DNA glycosylases）能识别DNA中的不正确碱基,如尿嘧啶、次黄嘌呤和黄嘌呤,这些碱基是由胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤脱氨形成的.DNA糖基化酶可以切断这种碱基N-糖苷键,将其除去,形成的脱嘌呤或脱嘧啶部位通常称为"abasic"部位或AP位点.然后由AP内切核酸酶（AP endonucleases）切去含有AP位点的脱氧核糖-5-磷酸,在DNA聚合酶作用下重新放置一个正确的核苷酸,最后通过DNA连接酶将切口封闭.每种DNA糖基化酶通常对一种类型的碱基损伤特异.
4.错配修复（mismatch repair）
在含有错配碱基的DNA分子中,使正常核苷酸序列恢复的修复方式.这种修复方式的过程是：识别出下正确地链,切除掉不正确链的部分,然后通过DNA聚合酶和DNA连接酶的作用,合成正确配对的双链DNA.
错误的DNA复制会导致新合成的链与模板链之间的产生错误的碱基配对.这样的错误可以通过E.coli中的3个蛋白质（MutS、MutH和MutL）校正.该修复系统只校正新合成的DNA,因为新合成DNA链的GATC序列中的A（腺苷酸残基）开始未被甲基化.GATC中A甲基化与否常用来区别新合成的链（未甲基化）和模板链（甲基化）.这一区别很重要,因为修复酶需要识别两个核苷酸残基中的哪一个是错配的,否则如果将正确的核苷酸除去就会导致突变.(右图)说明了MutS、MutH和MutL三种蛋白质是如何校正新合成DNA中的一个错配错误的.未甲基化的GATC序列不需要紧靠着错配碱基,因为错配碱基与GATC序列之间的间隔的DNA序列可以被外切核酸酶切除,是从3ˊ还是从5ˊ方向切除取决于不正确碱基的相对位置.
题2： 关于基因保养和DNA修复1982年,雅诗兰黛NightRepair首创细胞DNA修护概念,那为什么说兰蔻的美颜活肤液是全球首款“基因保养”护肤产品?
虽然自己是学生物学的,可是从来没有关注过这种问题,可能是男生,没情趣的理科男,不懂这些.看了你的问题,我专门查了资料看了一下,首先解释一下什么是衰老,人皮肤细胞的分裂次数是一定的,让每一代细胞活的长点,减缓细胞的坏死速度是可以减缓衰老的,细胞损伤和基因损伤都会导致细胞死亡.基因和DNA是一样的,这就是基因修复和基因保养的区别了,雅诗兰黛这款产品主要起作用的物质是烷基鸟嘌呤转移酶,它是具有基因损伤修复的功能的.兰蔻的主要是刺激基因分泌desmoglein 1与CLSP这两种保护性的蛋白质.其实吧,我是觉得他们都在说一些非大众化的东西,让别人觉得很科学很专业,本质都在说一些无法证实的东西,突然发现我无聊了.祝你永远年轻漂亮!
题3： 【吃基因补基因是否赞成这种观点说明理由.】
不赞成.这个观点极其荒唐.DNA是脱氧核糖核酸,是生物体依照自身DNA为模版复制合成的.吃基因经过消化系统之后,都变成尿酸,嘌呤等一些小分子,有些能被身体吸收,有些不能.直接补基因无从谈起.
题4： 试说明DNA损伤的类型及其修复机制[生物科目]
1）○1细胞内源性的损伤—复制错误,碱基脱氨氧化；
○2环境因素造成的损伤—辐射（TT）致癌物质（烷化剂、EB亚硝酸等）如碱基的损伤、错配,碱基的缺失,碱基的交联等.
2）○1错配修复系统恢复错配；
○2碱基切除修复系统切除突变碱基；
○3核苷酸切除修复系统修复被破坏的DNA；
○4DNA直接修复系统修复嘧啶二聚体或甲基化DNA.
题5： DNA修复精华?DNA修复精化我想知道的更详细一点,谁帮我解释下,谢谢了,a11http://baike.baidu.com/view/4028064.htm?fr=ala0_1_1这个上说的东西怎么样？
DNA修复精华产品介绍：
使用DNA修复精华可以有效抑制除菌,除螨.改善肌肤微循环,抚平疤痕,淡化消除青春痘印痕,净白肌肤.DNA修复精华令肌肤保持自然健康,还您一张美丽脸庞!
DNA修复精华适用人群：
DNA修复精华适用于各种年龄层次的青春痘患者.
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