试设计一个实验分离土壤中的细菌、放线菌、霉菌的纯培养
编辑： admin 2017-12-03
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1.分别配细菌、放线菌和霉菌的培养基
2.得到不同浓度土壤溶液,涂布在三种培养基上.
3.从三种培养基上分别挑取单菌落,划线培养
类似问题
类似问题1：如何对土壤中细菌、放线菌及霉菌数量进行测定,要求设计实验方案![生物科目]
【实验内容及步骤】
一、分离
1.\x05制备土壤悬液及系列稀释液
称取土壤1g,放入99mL无菌水的三角瓶中,振荡10min,即为稀释10－2的土壤悬液.另取装有无菌试管5支,用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6 、10－7 .在每只试管中用无菌吸管加入4.5ml无菌水.取已稀释成10－2的土壤液,振荡后静止0.5min,用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中,并在试管内轻轻吹吸数次,使之充分混匀,即成10－3土壤稀释液.同法依次连续稀释至10-4、10-5、10-6、10-7土壤悬液.
2.\x05倒平板
将已经配制好的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、土豆培养基在电热炉上熔化.在无菌工作台的酒精灯旁,将培养基倒入培养皿中,加盖后轻轻摇动使其在培养基上均匀铺开,平置于桌面上,待其凝固后即为平板,注意保证无菌操作.
3.\x05涂布法分离各类微生物
将0.2ml菌悬液滴在平板表面中央位置,右手拿无菌涂布器平放在平板表面,将菌悬液先沿一条子线轻轻的来回推动,是之均匀分布,然后改变方向沿另一直线来回推动,平板边缘可改变方向用涂布器再涂布几次.
4.\x05培养（incubation）
28~30C,24~48hr
5.\x05观察记录结果、记数（counting plates）：细菌数量=数出的菌落数/稀释度.例如,10-5稀释度时菌落数为125个,则细菌数量=125/10-5=1.25*107个/ml.
这个是大学的实验,用的方法是稀释涂平板计数.
类似问题2：培养细菌、放线菌、酵母菌、霉菌分别用哪些常用的培养基?[生物科目]
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等.
类似问题3：土壤放线菌的分离 老是分离不出来采回来的土样风干两天,用高氏一号培养基,平板涂抹法,为什么总是没有放线菌.其次,放线菌菌落形态特征是什么?如何与真菌区别?[生物科目]
放线菌菌落小而紧密、干燥、不透明、难以挑取,当大量孢子覆盖于菌落表面时,就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落,由于基内菌丝和孢子常有颜色,使得菌落的正反面呈现出不同的色泽.
你说与真菌的差别?主要是说跟霉菌吧?霉菌菌落的话应该是比较大的,可能是大而疏松也可能大而紧密,其他一些跟放线菌都差不多,比如都是颜色多种多样,与培养基紧密结合难于挑取.但在气味上有很大差别,放线菌具有泥腥味,而霉菌具有霉味.还有一点就是放线菌菌落周围琼脂平面会有变形的现象.你说没找到放线菌,可能是你稀释平板的稀释度不够,你试一下稀释到10-6或者10-5,看能不能找到放线菌.可能是稀释度不够,放线菌抑制了或者菌落太小,而其他细菌的菌落又太多,不容易找到.
类似问题4：如何从土壤中分离得到一株可以产生某种从未被发现的新的抗生素的放线菌?最好能设计一个实验~[生物科目]
是这样的,放线菌好分离,因为每一株都有可能带有某种从未被发现的新的抗生素,难得是后面的检测抗生素的过程.
连续稀释分离法
①取1克土样,在火焰旁放入装有99毫克无菌水的锥形瓶内,充分摇匀,将菌分散.
②用移液管吸取上述菌悬液1毫升,放入盛有9毫升无菌水的试管中,并进一步稀释成1000倍,即10-3的菌悬液.按10倍稀释法连续稀释到10-8（每1次稀释,都须更换移液管）.
③取3支1毫升移液管分别从10-8、10-7、10-6菌悬液中吸取1毫升菌悬液,分别注入编号10-8、10-7和10-6的培养皿内,同一稀释液重复做3个培养皿.
④将温度为45～50℃的营养琼脂培养基（其成分和配制方法见本章第三节）倒入上述各培养皿内,轻轻旋转使菌悬液充分混合均匀,凝固后,将培养皿倒扣放置在温暖处（28℃左右）,每天观察培养基表面有无微生物菌落.
⑤经过一定时间培养后,培养基上长出菌落,根据菌落特征,初步判断属于何种类型的微生物,并在显微镜下检查,若菌体形态一致,则可认为是初步分离到纯菌种放线菌.
⑥将分离培养所得的纯菌种,从平板培养基转移到试管斜面培养基上培养.
平板划线分离法
①取1克土样,在火焰旁加进装有99毫升无菌水的锥形瓶中,堵塞棉塞,制成菌悬液待用.
②取一培养皿置于实验台上,左手将培养皿打开稍许,向培养皿内注入熔化的营养固体培养基10～12毫升,轻轻转动培养皿,使其中的培养基分布均匀,平放桌上,使其凝成平板.然后在皿底用蜡笔划分A、B、C、D几个区.应连续制作几份平板培养基.
③将培养皿底部用姆指和无名指固定成倾斜状态,在火焰旁将培养皿稍微打开.在此同时,用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液,迅速送入培养皿内,在平板培养基的一边,作第1次平行划线 7条,转动培养皿约70°角,用烧过冷却的接种针,通过第1次划线部分作第2次平行划线,然后再用同样方法,作第3次平行划线.划线时,应使平板培养基表面向下,以免空气中杂菌落入.接种针应与平板表面成30°角左右.不要使接种针碰到培养皿边缘,也不要将培养基划破.
④将划线后的培养皿倒放在28℃左右的温暖处进行培养,待长出菌落后,鉴定微生物类群,并根据镜检结果,判断是否已分离到了纯菌种.如果菌种很纯,则可转移到斜面培养基上进一步培养.
连续稀释分离法和平板划线法,均须在无菌室或接种箱内进行.
注：如果菌落的硬度较大,干燥致密,且与基质紧密结合,不易被针挑起,这就是放线菌菌落.
类似问题5：一般土壤中分离的菌是什么细菌[生物科目]
土壤中有许多微生物,数量从多到少一次为细菌、放线菌、真菌、藻类和原生动物.